Отдел молекулярной биологии и генетики
КРУПНЫЕ ХРОМОСОМНЫЕ ПЕРЕСТРОЙКИ В ШТАММАХ MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS BEIJING B0/W148 КЛАСТЕРА
Шитиков Е.А., Беспятых Ю.А., Карпова И.Ю., Кострюкова Е.С.
Лаборатория молекулярной генетики микроорганизмов
Туберкулез, вызываемый M. tuberculosis (MTB), является одной из значимых проблем здравоохранения и социального развития страны. Среди MTB можно выделить генетические линии, склонные к увеличенной трансмиссивности и вызывающие более активное течение заболевания. Для России такой “успешной” линией является клональная группа B0/W148 генотипа Beijing. Цель настоящего исследования состояла в изучении особенностей представителей кластера на геномном уровне. В ходе исследования было проведено полногеномное секвенирование четырех образцов кластера B0/W148 на платформе Genome Sequencer FLX system. Полученные данные использовались для поиска однонуклеотидных полиморфизмов (SNPs) и для сравнения с другими геномами МТВ, представленными в GenBank. Сравнительный филогенетический анализ на основе SNPs установил сходство секвенированных образцов со штаммом W-148, представленным в GenBank в виде одного скаффолда. Выравнивание генома W-148 на последовательность референтного штамма H37Rv показало наличие двух больших инверсий в геноме W-148. Для подтверждения инверсий было проведено полногеномное секвенирование одного из образцов с использованием библиотеки парных фрагментов, а также гибридизационный анализ по Саузерну. Дополнительно была разработана ПЦР-система для детекции инвертированных участков. Согласно нашей гипотезе в ходе первого рекомбинационного события произошла инверсия протяженного сегмента хромосомы длиной 3 м.п.о. Вторая инверсия, произошедшая внутри измененного участка, затронула 2.1 м.п.о. и восстановила ориентацию части внутреннего сегмента хромосомы. Описанные инверсии среди штаммов B0/W148 кластера представляют еще один яркий пример геномных перестроек в МТВ в дополнение к недавно опубликованным крупным дупликациям. Описанные случаи показывают, что крупные геномные перестройки среди изолятов МТВ могут возникать чаще, чем считалось ранее, и мы надеемся, что дальнейшие исследования помогут определить точный механизм рекомбинаций.
ТАЙНА ПЯТОГО КЛОНА, ИЛИ УТОЧНЕНИЕ МЕХАНИЗМА УСТОЙЧИВОСТИ ПНЕВМОКОККА К ОПТОХИНУ МЕТОДАМИ СРАВНИТЕЛЬНОЙ ГЕНОМИКИ
Икрянникова Л.Н.1, Ломинадзе Г.Г.2, Ищенко Д.С.1, Кострюкова Е.С.1, Карпова И.Ю.1, Семашко Т.А.1, Ларин А.К.1, Маянский Н.А.2
1Лаборатория молекулярной генетики микроорганизмов
2Московский Научный центр детского здоровья РАМН, Москва, Россия
Тест на устойчивость к оптохину повсеместно используется в клинико-диагностических лабораториях для разделения штаммов S. pneumoniae и других представителей группы viridans. Несмотря на то, что большая часть пневмококков чувствительна к оптохину, встречаются штаммы, проявляющие устойчивость к этому субстрату. В данной работе были прочитаны и исследованы геномы пяти неинкапсулированных (нетипируемых) штаммов S. pneumoniae, которые являлись генетическими клонами согласно MLSA-анализу, при этом четыре штамма были чувствительны к оптохину, в то время как пятый оказался оптохин-устойчивым. Геномы были прочитаны на генетических анализаторах Ion Torrent PGM (Life Technology, США) и GS FLX+ (Roсhe, США) и собраны с помощью программного обеспечения GS De Novo Assembler v. 2.8 (Roсhe, США). Аннотация геномных последовательностей осуществлялась с помощью ресурса PGAP Национального центра биотехнологической информации США (NCBI) и автоматизированной системы аннотации бактериальных геномов RAST v. 4.0 (США). Сравнение аннотированных геномов устойчивого и чувствительных штаммов выявило ряд несинонимичных замен в более чем тридцати аминокислотных последовательностях, транслированных с полученных в результате секвенирования нуклеотидных последовательностей, в том числе и в субъединице С АТФ-синтазы, которая обычно ассоциируется с устойчивостью к оптохину.
Х-ФАКТОР НАЙДЕН! РАСШИФРОВКА НЕОБЫЧНОГО МЕХАНИЗМА ФОРМИРОВАНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ ГОНОКОККОМ
Ильина Е.Н., Малахова М.В., Бодоев И.Н., Побегуц О.В., Ковальчук С.И., Алтухов И.А., Хлебус Э.Ю., Говорун В.М.
Лаборатория молекулярной генетики микроорганизмов; лаборатория протеомного анализа; лаборатория биоинформатики
Гонорея, вызываемая N. gonorrhoeae (NG), является вторым по распространенности в мире заболеванием, передающимся половым путем. Одной из особенностей NG является высокая пластичность генома, благодаря которой гонококк сравнительно легко формирует лекарственную устойчивость. Нами исследован клинический изолят i19.05, проявляющий устойчивость к пенициллину (МПК = 0,5 мг/л), тетрациклину (МПК = 0,5 мк/л) и азитромицину (МПК = 1,0 мк/л) на фоне отсутствия известных генетических детерминант резистентности, кроме penA, который не объясняет такой фенотип. Целью нашего исследования было нахождение новых молекулярных механизмов лекарственной устойчивости. На основе сравнительного анализ геномной последовательности изолята i19.05, референсных геномов и чувствительного ко всем антибиотикам гонококка было установлено, что штамм i19.05, помимо penA мутации, содержит мутации в генах, кодирующих переплазматический шаперон SurA и белок OMP85, ответственных за биогенез внешней мембраны. Эти гены были отобраны как потенциально вовлеченные в формирование резистентности. Протеомный анализ исследуемых изолятов также выявил различия в белках внешней мембраны. Мы использовали амплифицированые фрагменты геномной ДНК изолята i19.05, содержащие мутантные гены surA, Omp85 и penA для спот-трансформации реципиентного штамма n01.08. Отбор трансформантов проводился на среде с пенициллином (0,12 мг/л, 0,25 мг/л, и 0,5 мг/л). Нами получены пять трансформантов: NG01(Ompmut), NG02(SurAmut), NG03(SurAmut,Omp85mut), NG04(PenAmut), и NG05(SurAmut, Ompmut, PenAmut). Во всех случаях трансформанты проявляли сниженную восприимчивость к пенициллину, МПК пенициллина для NG05(SurAmut, Ompmut, PenAmut) была 0,5 мк/л (аналогично i19.05). Таким образом, нами продемонстрирован новый молекулярный механизм формирования лекарственной устойчивости гонококком.
ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА РЕКОМБИНАНТНЫХ ФРАГИЛИЗИНОВ-1, 2, 3
Харлампиева Д.Д., Манувера В.А., Подгорный О.В., Графская Е.Н., Ковальчук С.И., Побегуц О.В., Алтухов И.А., Алексеев Д.Г., Лазарев В.Н.
Лаборатория генной инженерии; лаборатория протеомного анализа;
лаборатория биоинформатики
Представители энтеротоксигенных штаммов Bacteroides fragilis секретируют во внешнюю среду металлопротеазу – фрагилизин, или BFT (B. fragilis toxin). Описаны три близкие изоформы фрагилизина. Мы получили рекомбинантные профрагилизины 1, 2 и 3 и разработали метод их процессинга in vitro. Показано связывание профрагилизинов и зрелых фрагилизинов с метал-хелатным сорбентом. При этом изоформа 3 (пробелок и его зрелая форма) слабее связывается с Ni-сефарозой по сравнению с изоформами 1 и 2. Разработан способ активации профрагилизина, связанного с метал-хелатным сорбентом на колонке, путем пропускания через нее раствора трипсина. Установлено также, что в растворе все три изоформы (как про-, так и зрелые фрагилизины) образуют комплекс с молекулярной массой не менее 1 МДа. Показана биологическая активность полученных рекомбинантных зрелых форм фрагилизина (способность изменять морфологию клеток линии НТ-29 и вызывать расщепление белка плотных контактов – Е-кадгерина). Тем не менее, не удалось продемонстрировать, что именно Е-кадгерин является субстратом для фрагилизина – расщепление рекомбинантного Е-кадгерина, полученного в гетерологичной системе Escherichia coli, не происходило при инкубации со зрелым фрагилизином-2. С использованием тандемной хроматомасс-спектрометрии впервые были идентифицированы белки, высвобождающиеся в культуральную среду после обработки фрагилизином-2 клеток линии НТ-29. Показано высвобождение не только Е-кадгерина, но и других типов кадгеринов – протокадгерина, кадгерина-17. Отобрано 12 кандидатных белков для дальнейшего изучения взаимодействия фрагилизинов с клетками линии НТ-29.
СИСТЕМНЫЙ АНАЛИЗ АНГИДРОБИОЗА POLYPEDILUM VANDERPLANKI
Алтухов И.А.1, Мазин П.В.1, Побегуц О.В.2, Ковольчук С.И.2, Кикавада Т.3, Бутенко И.О.2, Аниканов Н.А.2, Алексеев Д.Г.1, Говорун В.М.2
1Лаборатория биоинформатики; 2лаборатория протеомного анализа;
3NIAS, Япония, Токио
Чтобы справиться с засухой, организмы выработали несколько стратегий для выживания. Ангидробиоз является одним из способов. Личинки хирономиды P.vanderplanki, населяющие полузасушливою область в Африке, являются типичным примером. Не смотря на то, что гены и молекулы, участвующие в агидробиозе описаны, до сих пор нет полного понимая механизмов выживания хирономид на системном уровне. Нами был выполнен полный количественный транскриптомный, протеомный и метаболомный анализ в разных стадиях развития по мере десикации и ре-гидратации хирономид, склонных к криптобиозу. Сравнительный анализ результатов количественных -омных экспериментов и рассмотрения их в системном контексте позволяет сделать выводы о механизмах ангидробиоза. В результате наших исследований было показано, что способность личинок успешно восстанавливаться после ангидробиоза напрямую связана с повышением экспрессии защитных генов, таких как оксиданты, например LEA белки и тиоредоксины (Trx). Полученные результаты позволяют построить системную модель криптобиоза.
РАЦИОНАЛЬНЫЙ ДИЗАЙН ДНК-АПТАМЕРОВ НА ОСНОВЕ G-КВАДРУПЛЕКСОВ
Варижук А.М., Позмогова Г.Е.
Лаборатория искусственного антителогенеза>
Поиск новых лекарственных средств методом химической модификации известных фармакофоров – одно из ключевых направлений современной биомедицины. Природа G-квадруплексных ДНК-аптамеров (например, к HIV-интегразе, gp120 HIV, NS1 вируса гриппа, к тромбину и др.), позволяет модулировать их свойства и с помощью альтернативного подхода, основанного на введении дополнительных олигонуклеотидных модулей. В настоящей работе с целью поиска новых антикоагулянтов впервые было синтезировано более 30 химических и структурных аналогов тромбин-связывающего аптамера (TBA). Проведен сравнительный анализ тиофосфорильных, триазольных и альфа-аномерных ТВА, а также производных ТВА, содержащих концевые модули (ds-ДНК). Изучена их нуклеазная биодеградация, аффинность к тромбину и антикоагуляционные свойства в плазме крови (тромбиновое время). Структура аптамеров и связывание с тромбином исследованы методами УФ, КД, ЯМР, молекулярного моделирования, MALDI-MS, поверхностного плазмонного резонанса, AFM - микроскопии и др. Выявлен ряд закономерностей рационального дизайна ТВА-аналогов и наиболее перспективные соединения. Результаты работы в 2013 г. частично опубликованы (Varizhuk at al. Eur J Med Chem. 2013 Varizhuk at al. J Org Chem. 2013.), доложены на международных конференциях (Pozmogova at al. FEBS J. 2013; Varizhuk at al.; Tsvetkov at al. там же).
ОРГАНИЗАЦИЯ ТРАНСКРИПЦИОННЫХ ЕДИНИЦ В ГЕНОМЕ MYCOPLASMA GALLISEPTICUM
Фисунов Г.Ю., Горбачёв А.Ю., Мазин П.В., Семашко Т.А., Говорун В.М.
Лаборатория протеомного анализа; лаборатория биоинформатики;
лаборатория постгеномных исследований в биологии
Представители класса Молликут, в частности, Mycoplasma gallisepticum отличаются существенно редуцированными геномами. Кроме этого, для них характерна редукция систем регуляции транскрипции. Тем не менее, транскрипционный анализ показывает, что M. gallisepticum может изменять уровни транскрипции большого количества генов при стрессовых воздействиях.
В настоящей работе было проведено количественное транскрипционное профилирование M. gallisepticum в шести состояниях: логарифмическая фаза, тепловой стресс в логарифмической фазе, окислительный стресс в логарифмической фазе, осмотический стресс в логарифмической фазе, стационарная фаза, тепловой стресс в стационарной фазе. Также было проведено полногеномное картирование сайтов инициации и терминации транскрипции в логарифмической фазе и в тепловом стрессе.
В результате было обнаружено, что фаза роста оказывает определяющее воздействие на способность клетки отвечать на стресс. В стационарной фазе стрессовый ответ не происходит, а также имеет место подавление транскрипции большинства генов. Окислительный стресс вызывает специфический ответ, связанный с увеличением транскрипции генов, продукты которых защищают клетку от активных форм кислорода. Приспособительная ценность изменений транскрипции генов в осмотическом стрессе пока неочевидна. Тепловой стресс приводит к изменению транскрипции сотен (363) генов и включает также SOS-ответ и ответ на окислительный стресс, а также приводит к снижению транскрипции генов поверхностных антигенов. Картирование промоторов позволило установить структуру промоторов M. gallisepticum, главным элементом которых является ТАТА-бокс (ТАТААТ). Кроме этого в сильных промоторах присутствует EXT-элемент. Оптимальным инициирующим нуклеотидом является A или G, а промотор должен располагаться внутри АТ-богатого окружения. Также было обнаружено, что в тепловом стрессе происходит включение «спящих» и активация транскрипции альтернативных промоторов.
АНАЛИЗ ДИНАМИКИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ СООБЩЕСТВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТАГЕНОМНЫХ ДАННЫХ
Коварский Б.А., Тяхт А.В., Мазин П.В., Попенко А.С., Алексеев Д.Г.
Лаборатория биоинформатики
Метагеномика стремительно развивающаяся последнее десятилетие область геномики. В тех случаях, когда организмы, входящие сообщество являются труднокультивируемыми исследование метагенома является практически единственным способом получения общей картины структуры сообщества. Однако большинство метагеномных исследований ограничивается определением видового разнообразия и относительных представленностей различных таксонов. Относительно процессов формирования микробиоты человека до сих пор не решен вопрос, как происходит заселение микроорганизмами, наследуем ли мы микробиоту от своих родителей, или же в течение всей жизни способны к обмену различными штаммами. Сравнивая геномы микроорганизмов можно попытаться ответить на этот вопрос, что и является целью данного исследования, а также определение закономерностей в их мутационных изменениях в зависимости от разных факторов.
Мы провели анализ таксономического состава и полиморфизмов в 495 метагеномах. Были выявлены различные паттерны кластеризации образцов в зависимости от исследуемого штамма.
Более детально была рассмотрена временная серия из 14 пар метагеномных образцов. Промежуток между взятиями образца кала у одного человека составлял примерно один год. Особенность этих данных состоит в том, что все четырнадцать субъектов (солдат) проживают совместно и имеют сходный рацион. Хотя нам и не удалось детально охарактеризовать бактериальные штаммы, характерные для разных субъектов и подтвердить возможность их передачи горизонтально, тем не менее некоторые штаммы в разных субъектах оказались значительно ближе по сигнатурам нежели другие.
ИЗМЕНЕНИЕ МЕТАБОЛОМА И ПРОТЕОМА E.coli ПРИ ДЕЛЕЦИИ ХУ БЕЛКА. РАСПЕРДЕЛЕНИЕ ХУ ПО ХРОМОСОМЕ E.coli.
Камашев Д.Э., Ванюшкина А.А., Побегуц О.В., Ковальчук С.И., Евсютина Д.В., Коржаковский Д., Ракитина Д.В., Говорун В.М.
Лаборатория протеомного анализа;
лаборатория Белковая фабрика НИЦ Курчатовский институт
Делеция хроматин-устраивающего белка ХУ для E. coli нелетальна. Кривая роста клеток при стандартных условиях не меняется. Однако стрессовые воздействия – повышение или понижение температуры, увеличение ионной силы, изменение кислотности или облучение - убивают мутант. Нуклеоид-ассоциированный ХУ белок играет важную роль в организации упаковки хромосомы клетки, а также вовлечен во множество процессов, включая трансляцию, рекомбинацию и исправление ошибок в генах. Мы исследовали, как E. coli приспосабливается к отсутствию ХУ.
Мы представляем результаты идентификации максимально возможного количества метаболитов клеток E.coli с делетированным ХУ белком и диким типом клеток. Анализ внутриклеточных метаболитов мы проводили с помощью метода хроматографии, совмещенной с высокоточной времяпролетной масс-спектрометрией (HPLC-Q-TOF).
Протеом E. сoli дикого типа и мутанта сравнивали методом двумерного электрофореза с дифференциальным окрашиванием, с последующей идентификацией белков на MALDI- MS (TOF). Сравнение протеомов проводилось также методом SWATH. Методом Chip-Seq мы определили, как ХУ белок распределен по хромосоме.
Интегрирование данных показывает, что мутант накапливает сахара и их производные, производит пролин и аспарагин в повышенных количествах, накапливает рибозу, расщепляя нуклеотиды, имеет повышенную концентрацию Ацетил-КoA и ThРР. Совокупный анализ метаболома, протеома и транскриптома позволили предположить принципиальную разницу в регуляции жизнеобеспечения клеток с делетированным ХУ белком и диким типом E.coli.
СИСТЕМА РЕПАРАЦИИ ДНК У MYCOPLASMA GALLISEPTICUM
Горбачев А.Ю., Фисунов Г.Ю., Евсютина Д.B., Мазин П.В., Алексеев Д.Г., Побегуц О.В., Ванюшкина А.А., Ковальчук С.И., Камашев Д.Э., Говорун В.М.
Лаборатория протеомного анализа; лаборатория биоинформатики
Организмы, принадлежащие к классу Mollicutes, для представителей которого характерно отсутствие клеточной стенки, являются наименьшими по размеру известными организмами, способными к самостоятельному существованию. Один из представителей данного класса – M. gallisepticum характеризуется, помимо прочего, отсутствием ключевых элементов системы мисматч-репарации ДНК, необходимой для распознавания и коррекции ошибок репликации, например, таких как некорректное спаривание. Проведенный в нашем исследовании скрининг клеточного экстракта M. gallisepticum выявил белок, который способен связывать однонуклеотидные мисматчи в дцДНК-фрагментах. Данный белковый фактор был идентифицирован как гомолог HU-белка E. coli. Во второй части нашего исследования мы стремились наиболее полно охарактеризовать систему репарации M. gallisepticum. Основываясь на геномных и литературных данных, мы составили список участников различных путей репарации ДНК, содержание которых было проанализировано на уровне транскрипции по представленности их мРНК (количество копий на клетку) в нормальных условиях и под влиянием различных стрессоров. Мы также провели исчерпывающий протеомный анализ и идентифицировали большую часть участников систем репарации ДНК на белковом уровне. При этом было показано, что даже в отсутствие известных для других организмов регуляторов у M. gallisepticum происходит индукция SOS-ответа на транскрипционном уровне в ответ на стрессорные воздействия. В третьей части нашего исследования мы продемонстрировали повышение уровня АФК внутри клеток M. gallisepticum, приводящее к повреждениям ДНК с образованием 8-оксогуанина. При этом система репарации успевает устранить все повржедения, поскольку значимого возрастания уровня мутагенеза не происходит.
МЕТАБОЛОМ МОЛЛИКУТ
Ванюшкина А.А., Камашев Д.Э., Горбачев А.Ю., Фисунов Г.Ю., Говорун В.М.
Лаборатория протеомного анализа
Для получения целостного представления о живом организме недостаточно информации о процессах регуляции на транскрипционном уровне и данных протеомики. Данные необходимо интегрировать с метаболическим профилем организма, представляющим собой живой отпечаток клеточной активности. Объектом наших исследований являются бактерии класса Молликут (Spiroplasma melliferum, Mycoplasma gallisepticum, Acholeplasma laidlawii) отличающиеся простотой устройства клеток, паразитическим образом жизни и редуцированным геномом. Цель нашей работы – выяснение фундаментальных отличий в принципах регулирования метаболизма бактерий класса Молликут. Анализ внутриклеточных метаболитов мы проводили с помощью метода гидрофильной хроматографии, совмещенной с высокоточной масс-спектрометрией (HPLC-Q-TOF). Нам удалость надежно детектировать около 80 метаболитов для каждого вида исследуемых бактерий (S. melliferum, M. gallisepticum, A. laidlawii), включая важнейшие классы внутриклеточных веществ, участвующих в основных метаболических процессах бактерии. Метаболизм Молликут был реконструирован с использованием данных протеогеномной аннотации, предоставленной нашей лабораторией ранее. Все результаты были нанесены на метаболические карты и тщательно проанализированы. Мы обнаружили метаболиты пентозофосфатного пути и предположили его активность при отсутствии у исследуемых Молликут важнейшего фермента - трансальдолазы (tal). Также мы выявили отличия у S. melliferum, M. gallisepticum, A. laidlawii в синтезе терпеноидов и орнитиновом цикле синтеза.
БИОМЕДИЦИНСКИЕ ПРИЛОЖЕНИЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТРАНСКРИПЦИОННОЙ АКТИВНОСТИ В КУЛЬТУРАХ КЛЕТОК МЛЕКОПИТАЮЩИХ
Манувера В.А., Полина Н.Ф., Ковальчук С.И., Побегуц О.В., Лазарев В.Н.
Лаборатория генной инженерии, лаборатория протеомного анализа
Основным способом среднесрочного и долгосрочного ответа живой клетки на внешние воздействия является изменение транскрипционной активности. В большинстве случаев, для каждого типа воздействия происходит активация одного или нескольких транскрипционных факторов, в результате чего происходит активация одних генов и репрессия других. Измерение транскрипционной активности на уровне активации транскрипционных факторов, в общем случае, более точно и достоверно говорит об ответе клетки на внешнее воздействие, чем измерение на уровне отдельных генов. Мы получили линии клеток человека, в которых активация репортерного гена, кодирующего EGFP под контролем промотора, чувствительного к определенному транскрипционному фактору, может быть использована для выявления антигипоксических соединений и выявлении биологически активных стероидных соединений. Получены плазмиды, содержащие наряду с минимальным промотором цитомегаловируса и репортерным геном, сайты связывания человеческих транскрипционных факторов HIF и GATA, активируемых при гипоксии. Показана активация репортерного гена в ответ на гипоксические условия или в случае воздействия хлорида кобальта. Получена плазмида, содержащая репортерный ген EGFP под контролем чувствительного к стероидным соединениям промотора из длинных концевых повторов вируса рака молочных желез мышей. Показана активация репортерного гена в присутствии тестостерона в случае совместной трансфекции клеток полученной плазмидой и плазмидой, содержащей ген андрогенного рецептора человека.
ПОДХОДЫ К ВЫДЕЛЕНИЮ МИКРОВЕЗИКУЛ: ЯВЛЯЕТСЯ ЛИ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЕ ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЕ "ЗОЛОТЫМ СТАНДАРТОМ"? ПОИСК АЛЬТЕРНАТИВНЫХ МЕТОДОВ
Хомякова Е.Б.1, Евтушенко Е.Г.2, Морошкина С.Ю.1, Багров Д.В.2,3, Баринов Н.А.3, Клинов Д.В.3, Лазарев В.Н.1, Генерозов Э.В.1
1Лаборатория молекулярной генетики человека; 2МГУ, химический факультет; 3лаборатория медицинских нанотехнологий
Исследование экзосом и микровезикул в последние годы привлекает к себе большой интерес научного сообщества в связи с их ролью в межклеточной коммуникации, а также потенциального применения в качестве носителей маркеров различных заболеваний и терапевтических агентов. Дифференциальное центрифугирование остается одним из наиболее широко используемых методов изоляции экзосом/микровезикул, несмотря на то, что метод весьма трудоемкий и в большинстве случаев требует большого количества стартового материала, сопровождается существенными потерями и не обеспечивает гомогенности популяции изолированных микровезикул. Цель работы заключалась в анализе популяции частиц, седиментированных на каждом этапе дифференциального центрифугирования, и разработке возможных подходов, позволяющих изолировать более чистую фракцию экзосом с наименьшими потерями.
Мы анализировали размер, форму и концентрацию частиц, седиментированных при центрифугировании супернатанта клеточной культуры HТ29 при 500xg, 1000xg, 10000xg и 100000xg. Для оценки размера и измерения концентрации частиц использовался прибор NanoSight (NanoSight LTD, Великобритания). Морфология частиц анализировалась с использованием методов электронной и атомной силовой микроскопии.
Было продемонстрировано, что существенная часть сферических частиц размером 80-100 нм седиментируется уже при 10000xg. Чтобы подтвердить, что экзосомы
действительно могут быть частично седиментентированы на данном этапе протокола дифференциального центрифугирования, очищенные по стандартному протоколу экзосомы (5 минут в 500xg, 10 минут в 1 000xg, 30 минут в 10 000xg и 2 Х 60 минут в 100 000xg) были подвергнуты центрифугированию при 10 000xg г в течение 30 минут. Анализ осадка и супернатанта и показал присутствие идентичных частиц. Мы обсуждаем подходы, позволяющие устранить этап центрифугирования при 10000х, существенно увеличив тем самым эффективность изоляции и чистоту популяции экзосом.
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИИ СЕКВЕНИРОВАНИЯ SMRT PACBIO ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ СБОРКИ БАКТЕРИАЛЬНОГО ГЕНОМА НА ПРИМЕРЕ SPIROPLASMA MELLIFERUM.
Бабенко В.В., Манолов А.И., Кострюкова Е.С., Говорун В.М.
Лаборатория постгеномных исследований в биологии
Современные технологии секвенирования ДНК позволяют успешно характеризовать и описывать геномное разнообразие прокариотических и эукариотических организмов. Тем не менее, окончательная сборка полных геномов (например, получение замкнутого кольца для бактерий) только с помощью секвенирования, является очень не простой задачей. Основной проблемой являются сложно устроенные геномы, в составе которых присутствуют различного рода повторы, размеры которых превышают длины прочтения, доступные для большинства современных секвенаторов.
Целью нашей работы было получение полного генома бактерии Spiroplasma melliferum KC3.
Бактериальная хромосома S.melliferum составляет порядка 1,45 млн.п.н., и характеризуется низким ГЦ составом (26%). Важной особенностью геномов спироплазм является присутствие большого количества повторяющихся элементов преимущественно в виде фаговых последовательностей (от 20% размера генома и более), длина которых превышает 7 тыс.п.н.. Так же, для большинства спироплазм характерно наличие экстрахромасомной ДНК в виде крупных малокопийных плазмид. Все перечисленные особенности делают геном S.melliferum сложным объектом для секвенирования и последующей сборки.
Для того чтобы завершить геном мы решили воспользоваться секвенированием единичных молекул ДНК, с помощью технологии SMRT (Single molecule real time sequencing) PacBio.
В итоге была проверена уже имеющаяся сборка и получена частичная наиболее вероятная сборка генома, состоящая из 35 контигов хромасомальной ДНК (приблизительно 90% длинны всего генома). Помимо этого были собраны последовательности двух плазмид. В ходе работы было показано, что сочетание различных подходов cеквенирования позволяет улучшать качество сборки, однако именно длина прочтения остаётся наиболее важным параметром.
ВЛИЯНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ НА АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ КРОВИ МЫШЕЙ РАЗЛИЧНЫХ ЛИНИЙ В ПРОЦЕССЕ РОСТА ФИБРОСАРКОМЫ S37
Басырева Л.Ю., Бродский И.Б., Жаппарова О.Н., Гусев А.А., Михальчик Е.В., Гусев С.А.
Лаборатория морфологии; лаборатория биофизических методов диагностики
В настоящее время показано, что иммуноглобулины для внутривенного введения (IVIG) могут проявлять антиметастатическую активность и ингибировать развитие меланомы и рака толстой кишки у мышей. Ранее мы обнаружили, что IVIG по-разному влияет на рост фибросаркомы S37 у мышей линий СВА и C57BL/6.
В настоящем исследовании мы изучили активность нейтрофилов цельной крови интактных мышей линий CBA и C57BL/6 и на ранних стадиях роста опухоли.
Опухоль индуцировали подкожной инъекцией асцита, содержащего клетки фибросаркомы S37. Кровь для исследования забирали до, на 1 сутки и через 7 дней после инъекции клеток S37. Оценивали клеточный состав крови и люминол-зависимую хемилюминесценцию (ХЛ), индуцированную опсонизированным зимозаном (ОZ) в разных условиях (в присутствии и отсутствие кальция и IVIG). Величину ХЛ ответа крови нормировали на количество нейтрофилов в пробе.
Для интактных животных показано, что в отсутствие кальция OZ активирует только нейтрофилы мышей линии CBA. В присутствии кальция ХЛ ответ нейтрофилов мышей обеих линий одинаков. IVIG способен усиливать кальций-зависимый ХЛ ответ нейтрофилов крови, но только у мышей линии C57BL/6. На OZ-активацию нейтрофилов мышей линии CBA IVIG не действует.
На 1-й и 7-й дни после подкожной инъекции клеток S37 наблюдается опухоль- ассоциированный прайминг нейтрофилов мышей обеих линий (величина ХЛ ответа на OZ выше нормы). При этом на 1-й день IVIG усиливает OZ активацию нейтрофилов только у мышей C57BL/6, а на 7-й день ингибирует ХЛ ответы нейтрофилов крови мышей обеих линий.
Таким образом, выявленное ранее межлинейное различие в изменении скорости роста опухоли в присутствии IVIG сочетается с межлинейным различием в механизмах активации нейтрофилов в условиях нормы и на ранних стадиях роста опухоли.
Отдел биофизики
РОЛЬ СВЯЗЫВАНИЯ МИЕЛОПЕРОКСИДАЗЫ С ПОВЕРХНОСТЬЮ ЛИПОПРОТЕИНОВ НИЗКОЙ ПЛОТНОСТИ В ИХ ПРОАТЕРОГЕННОЙ МОДИФИКАЦИИ АКТИВНЫМИ ФОРМАМИ ГАЛОГЕНОВ
Соколов А.В., Костевич В.А., Панасенко О.М.
Лаборатория физико-химических методов исследования и анализа
Одним из факторов, способствующих окислительной/галогенирующей модификации липопротеинов низкой плотности (ЛНП), является миелопероксидаза (MПO). Ранее нами было показано, что MПO связывается с поверхностью ЛНП. Комплекс ЛНП-MПO разобщается в присутствии пептида EQIQDDCTGDED, имитирующего участок aпoB-100 (445-456) на поверхности ЛНП. В данной работе исследовано влияние этого пептида, а также ингибиторов и модуляторов галогенирующей активности MПO: церулоплазмина (CP), гидразида 4-аминобензойной кислоты (ABAH) и тиоцианата (SCNˉ), на аккумуляцию моноцитами/макрофагами холестерина и его эфиров после инкубации с ЛНП, подвергнутыми различным вариантам MПO-зависимой окислительной/галогенирующей модификации. Показано, что MПO в присутствии H2O2 и галогенидов (Clˉ, Brˉ) приводит к большей проатерогенной модификации ЛНП по сравнению с действием экзогенных активных форм галогенов (HOCl и HOBr). Моноциты, дифференцирующиеся в макрофаги, и нейтрофилы секретируют MПO в ответ на присутствие поврежденных ЛНП. Пептид EQIQDDCTGDED, разобщающий взаимодействие MПO и ЛНП, снижает захват модифицированных ЛНП и MПO моноцитами/макрофагами, препятствуя накоплению внутриклеточного холестерина. Полученные результаты свидетельствуют о важности связывания MПO с поверхностью ЛНП для их модификации и приобретения проатерогенных свойств. Комплексы МПО с апоВ-100-содержащими липопротеинами обнаружены в крови больных атеросклерозов. Пептид EQIQDDCTGDED, CP, ABAH и SCNˉ претендуют на роль антиатерогенных факторов, снижающих повреждение ЛНП функционирующей MПO и аккумуляцию холестерина макрофагами. Результаты работы доложены на 8th International Human Peroxidase Meeting (September 9-12, 2013, Sydney, Australia) и приняты в печать в журнал Chemistry and Physics of Lipids.
ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ НАНОЧАСТИЦ ЗОЛОТА НА КЛЕТКИ КРОВИ И НА СИСТЕМУ СВЁРТЫВАНИЯ
Асейчев А.В., Азизова О.А., Бекман Э.М., Пирязев А.П., Швачко А.Г., Салимов Э.Л., Акимова Н.И., Скотникова О.И.
Лаборатория биофизических основ патологии
Использование наноматериалов на основе золота в области медицины является актуальным направлением биомедицинских и фармацевтических исследований. В связи с этим в научных и прикладных исследованиях всё чаще поднимается вопрос изучения их биологической безопасности и токсичности. Целью данного исследования была разработка методического подхода для оценки биобезопасности НЧ золота (НЧЗ). Данный подход основан на комплексном изучении действия НЧЗ на клетки крови: лейкоциты, эритроциты и тромбоциты, и на систему свёртывания. Объектом исследования были выбраны НЧ золота различного размера, произведённые компанией BBI (Англия). Результаты:1. Методом люмино-зависимой хемилюминесценции (ЛЗХЛ) было показано, что НЧЗ с размерами 5 и 10 нм вызывали подавление продукции активных форм кислорода (АФК) нейтрофилами, а НЧЗ с размерами 30 и 60 нм незначительно повышали эту продукцию. При длительной инкубации НЧЗ с лейкоцитами НЧЗ с размерами 10, 30 и 60 нм подавляли ЛЗХЛ, а НЧ с размером 5 нм не оказывали действие на ЛЗХЛ. 2. Установлено, что НЧЗ золота не активируют осмотический гемолиз в процессе инкубации НЧЗ с цельной кровью в условиях ex vivo и гемолиз эритроцитов in vitro. 3. Было проведено исследование НЧЗ золота на тромбоцитарное и плазменное звено гемостаза. НЧЗ с размерами от 5 до 30 нм не оказывают влияния на АДФ – индуцированную агрегацию тромбоцитов, а более крупные НЧ с диаметром 60 нм подавляют эту агрегацию. Также нами исследовано влияние НЧ в трех базовых тестах, предназначенных для выявления нарушения системы гемостаза: во внешнем пути свертывания (тест «Протромбиновое время»), внутреннем пути («тест АЧТВ») и на конечном этапе превращения фибриногена в фибрин, так называемом общем пути (тест «Тромбиновое время»). Нами установлено, что НЧЗ не оказывают влияния на гуморальное звено системы гемостаза. Вывод работы: Полученные нами результаты свидетельствуют в пользу биологической безопасности НЧЗ в использованных концентрациях (от 20 до 38 мкМ) в экспериментах in vitro. Использованный нами подход по оценке биобезопасноти НЧЗ может быть применён для исследований токсического действия наночастиц in vivo.
МОДЕЛИРОВАНИЕ КВАНТОВОГО ВЫХОДА ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ ЗОНДА
4-ДИМЕТИЛАМИНОХАЛКОНА МЕТОДОМ НЕАДИАБАТИЧЕСКОЙ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ДИНАМИКИ.
Поляк Б.М., Гуларян С.К., Романов А.Н., Сакович Р.А.
Лаборатория биофизических методов диагностики
Квантовый выход является основной характеристикой, определяемой в методе флуоресцентных зондов. Изменчивость квантового выхода в зависимости от параметров окружения зонда определяет преимущества этого метода. Однако интерпретация данных, демонстрирующих эту изменчивость, затруднительна даже в модельных системах. Квантовый выход флуоресценции определяется кинетикой протекающих в возбужденном состоянии процессов, а скорости этих процессов весьма велики, поэтому получение экспериментальных данных сильно затруднено. В настоящей работе был смоделирован процесс безызлучательного перехода молекулы флуоресцентного зонда 4-ДМХ из возбужденного в основное состояние. Для этого использовался метод неадиабатической молекулярной динамики. Было оценено влияние различных факторов на скорость этого перехода. Было показано, что вероятность безызлучательного перехода в основное состояние в наибольшей мере зависит от подвижности поленовой цепи молекулы зонда. Этот результат удовлетворительно согласуется с данными эксперимента.
ИЗУЧЕНИЕ СТРУКТУРЫ НАНОФИБРИЛЛ ПЕПТИДА RADA-16
Багров Д.В., Газизова Ю.С., Клинов Д.В.
Лаборатория медицинских нанотехнологий
Пептид RADA-16 относится к самоассоциирующим пептидам, способным формировать нанофибриллы и гидрогели. RADA-16 является перспективным биосовместимым материалом для тканевой инженерии: он биодеградируемый, не иммуногенный, хорошо стимулирует адгезию клеток. Несмотря на значительный прогресс в изучении биомедицинских свойств RADA-16, структура его нанофибрилл описана сравнительно слабо. В нашей работе нанофибриллы RADA-16 были изучены методами атомно-силовой и просвечивающей электронной микроскопии. Обнаружено, что толщина нанофибрилл изменяется дискретно и составляет 1.8, 3.7, 5.5 и 7.3 нм, что соответствует одному, двум трем и четырем бислоям пептида. При замене аланинов на лейцины в структуре пептида (получившийся пептид имеет последовательность RLDL-16) толщина бислоя увеличивается до 2.4 нм. При обработке кислотой большая часть нанофибрилл разрушается, и становится возможным наблюдение процесса сборки упорядоченных структур из молекул RADA-16 на подложке. Обнаружено, что при адсорбции на слюду из кислой среды RADA-16 образует ленты, имеющие высоту над подложкой ~1 нм и ширину ~5 нм – они были интерпретированы как монослои пептида. Нанофибриллы RADA-16 способны связывать характеристические амилоидные красители – конго красный и тиофлавин Т. Амилоидоподобная структура нанофибрилл RADA-16 не противоречит их способности к биодеградации, хотя молекулярный механизм их разложения пока не установлен.
ОПТИЧЕСКАЯ ДЕТЕКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ ВИРУСОВ И КЛЕТОК
С ЛЕКАРСТВЕННЫМИ ПРЕПАРАТАМИ В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ
Морозова О.В., Баринов Н.А., Сильников В.Н., Исаева Е.И., Алдаров К.Г., Лазарев В.Н., Басманов Д.В., Клинов Д.В.
Лаборатория медицинских нанотехнологий
Для анализа связывания клеток, вирусов или белков между собой или с низкомолекулярными соединениями применяли оптическую детекцию в реальном времени, основанную на изменениях показателя преломления длиннопробежных поверхностных волн на поверхности фотонного кристалла в микрофлюидной камере, с использованием биосенсора EVA 2.0. Полиаминирование поверхности фотонного кристалла с последующей обработкой бифункциональным альдегидом обеспечивало иммобилизацию биологически активных белков, жизнеспособных эукариотических и бактериальных клеток, а также инфекционных вирусов. Конформационная стабильность вирусных антигенов и других белков подтверждена связыванием со специфическими поликлональными и моноклональными антителами. Методом атомно-силовой микроскопии показано отсутствие морфологических изменений у иммобилизованных супрамолекулярных структур и клеток. Окрашивание клеток трепановым синим, флуоресцентными красителями и МТТ тест подтвердили их жизнеспособность. Жизнеспособность бактериальных клеток была доказана посредством экспрессии гена зелёного флуоресцентного белка (GFP) на поверхности микрочипа. Количественное сравнение результатов связывания новых биомедицинских препаратов с индивидуальными клеточными и вирусными потенциальными мишенями с данными по связыванию этих соединений с сывороткой крови, эукариотическими или бактериальными клетками, вирионами и инфицированными клетками позволяет выявить специфичность и токсичность лекарственных препаратов. Оптическая детекция в реальном времени также необходима для исследования обратимости связывания биополимеров с лигандами.
Отдел клинико-экспериментальный
ВЛИЯНИЕ ПЕПТИДОВ ТИМУСА И СЕЛЕЗЕНКИ НА ФОРМИРОВАНИЕ ОБОРОНИТЕЛЬНЫХ УСЛОВНЫХ РЕФЛЕКСОВ У КРЫС
Киселева Н.М., Новоселецкая А.В., Зимина И.В., Иноземцев А.Н., Белова О.В., Арион В.Я.
Лаборатория молекулярной иммунологии и биохимии
В последние 15 лет появляются работы, демонстрирующие нейротропное и нейропротекторное действие различных пептидов тимуса. Целью настоящего исследования явилось изучение влияния пептидов тимуса (тактивина и тимулина) и селезенки на формирование оборонительных условных рефлексов у крыс. Эксперименты проведены на 180 половозрелых крысах Wistar. Перед началом исследования все животные тестировались в открытом поле для создания идентичных по поведению групп. При повторном тестировании в открытом поле у всех животных, получавших различные пептидные препараты, отмечали снижение уровня тревожности. При выработке условного рефлекса пассивного избегания под действием тимулина и тактивина через неделю и 2 недели наблюдался отставленный эффект на память, при котором латентный период (ЛП) перехода в темный отсек достоверно превышал контрольный уровень. При выработке условного рефлекса активного избегания (УРАИ) обучение в группах животных, получавших пептиды тимуса и селезенки, происходило быстрее, чем в контрольной группе. Следует отметить, что пептиды тимуса, помимо увеличения условных реакций, способствуют снижению ЛП перехода в другую часть камеры под действием условного сигнала. На фоне пептидов тимуса в первый день выработки УРАИ появляются реакции избегания, а на фоне пептидов селезенки только на второй или третий день. Показано, что после сбоя УРАИ наблюдалось резкое нарушение выработанного навыка у животных контрольной группы. Это выражалось в том, что в первом блоке предъявлений после сбоя число реакций избегания уменьшилось в 3 раза. Под действием пептидов селезенки нарушение было менее выражено, и после сбоя воспроизведение реакций избегания стало существенно выше, чем в контроле. Пептиды тимуса полностью предотвращали данное функциональное нарушение. Полученные данные позволяют утверждать, что тактивин и тимулин оказывают активирующее влияние на выработку у крыс условных рефлексов. Наиболее ярко эффект проявляется на начальных этапах формирования памятного следа. Мнемотропный эффект этих препаратов аналогичен действию классического ноотропного препарата пирацетама.
СОБСТВЕННЫЕ И РОДИТЕЛЬСКИЕ ПРЕДИКТОРЫ ВЫСОКОГО ХОЛЕСТЕРИНА ЛИПОПРОТЕИНОВ НИЗКОЙ ПЛОТНОСТИ В КРОВИ ДЕТЕЙ И ПОДРОСТКОВ С РОДИТЕЛЬСКИМ АНАМНЕЗОМ РАННЕЙ КОРОНАРНОЙ БОЛЕЗНИ СЕРДЦА
Коннов М.В., Деев А.Д.
Лаборатория клинической кардиологии
Цель: Оценить ассоциации между высоким холестерином липопротеинов низкой плотности (ХС ЛНП) у детей лиц с ранней (Р, начало ≤55 лет, мужчины; ≤60 лет, женщины) коронарной болезнью сердца (КБС) и некоторыми собственными и родительскими известными факторами риска (ФР) КБС. Методы: Мы обследовали членов 122 семей: 111 пробандов, их 103 супруга и 152 родных детей 5-17 лет. У детей высокий ХС ЛНП определяли как ≥90 процентиля (LRC-study, USA, 1981), его предикторы отбирали логистической регрессией. Результаты: ФР, ассоциированные с высоким ХС ЛНП (найден у 27.6% детей) с p<0.1 по данным однофакторного анализа (индекс массы тела [ИМТ], окружность талии, триглицериды, систолическое АД, вес при рождении, ХС липопротеинов высокой плотности (ЛВП) детей; ХС ЛНП, ЧСС, некурение пробанда; ХС ЛНП, некурение супруга) включены в пошаговую процедуру (таблица). Заключение/интерпретация: У детей лиц с РКБС высокий ХС ЛНП ожидаемо ассоциировался с родительским ХС ЛНП и собственным ИМТ. Обратная ассоциация с ЧСС пробанда, по-видимому, отражала прием β-блокаторов и тяжесть КБС. Ассоциация с родительским некурением, причины которого разнообразны, требует подтверждения в других исследованиях.
Независимые предикторы высокого ХС ЛНП у детей 5-17 лет |
ОШ |
95% ДИ |
p |
Собственный ИМТ, кг/м2: терциль 3 ([≥20,95] vs терциль 1 [<17,46]) |
6.50 |
2.05–20.6 |
0.002 |
ХС ЛНП пробанда, ммоль/л: терциль 3 ([≥4,33] vs терциль 1 [<3,22]) |
5.36 |
1.38–20.8 |
0.015 |
ЧСС пробанда, уд мин: терциль 3 ([≥72] vs терцили 1+2 [<72]) |
0.27 |
0.09–0.86 |
0.026 |
ХС ЛНП супруга, ммоль/л: терциль 3 ([≥3,78] vs терциль 1 [<3,18]) |
4.93 |
1.58–15.4 |
0.006 |
Некурение супруга |
3.36 |
1.13–10.0 |
0.030 |
ОШ – отношение шансов, ДИ – доверительный интервал
ВОЗМОЖНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МОДИФИЦИРОВАННОЙ ШКАЛЫ «РЕКОРД» ДЛЯ ОТБОРА ПАЦИЕНТОВ ДЛЯ ИНВАЗИВНЫХ ВМЕШАТЕЛЬСТВ ПРИ ОСТРОМ КОРОНАРНОМ СИНДРОМЕ
Эрлих А.Д.
Лаборатория клинической кардиологии
ПРЕДПОСЫЛКИ. Ключевым звеном в лечении острых коронарных синдромов (ОКС) является использования чрезкожных коронарных вмешательств (ЧКВ). Отбор пациентов, которые в первую очередь нуждаются в ЧКВ, является серьёзной клинической проблемой.
ЦЕЛЬ. Оценить возможность использования модифицированной прогностической шкалы РЕКОРД (РЕКОРД-м) для отбора пациентов, нуждающихся в срочном ЧКВ.
МЕТОДЫ. Анализировались объединенные данные пациентов, включенных в российские регистры ОКС РЕКОРД (2007-2008 гг.; n=796), РЕКОРД-2 (2009-2011 гг.; n=1656), а также в первый московский регистр ОКС (ноябрь 2012 г.; n=584). Шкала РЕКОРД-м включает 5 параметров (каждый – 1 балл): класс Killip≥II, подъём сегмента ST ЭКГ≥1мм, сист.АД≤100 мм рт.ст., возраст≥65 лет, диабет в анамнезе. Высокий риск ≥ 2 балла.
РЕЗУЛЬТАТЫ. Общая численность группы составила 3036 пациентов, из которых у 1130 (37,2%) был ОКС с подъёмом ST (ОКСпST). Среди пациентов в высоким риском по шкале РЕКОРД-м частота смертельных исходов была достоверно меньше у пациентов, получивших первичное ЧКВ, по сравнению с теми, кто не получил (11,5% vs. 21,4%; р=0,005; NNT=10), в среди пациентов с невысоким риском по шкале РЕКОРД-м это различие было недостоверным (1,4% vs. 3,3%; р=0,18; NNT=53). В группе пациентов Московского регистра у 152 пациентов были прослежены исходы через 6 месяцев от начала ОКС. Неблагоприятные события (смерть, новый инфаркт миокарда, инсульт) произошли у 24,3% пациентов. Среди пациентов с высоким риском по шкале РЕКОРД-м, которым в стационаре были выполнены срочные вмешательства (первичное ЧКВ при ОКСпST и ЧКВ в первые 72 час при ОКС без подъемов ST) неблагоприятные события произошли достоверно реже, чем у тех, кому вмешательства не выполнялись (0% vs. 46,2%; р=0,032; NNT=2), а у пациентов с невысоким риском по шкале РЕКОРД-м достоверного различия в частоте неблагоприятных событий между пациентами с вмешательством и без него, не выявлено (9,1% vs. 18,5%; р=0,68; NNT=11). ВЫВОДЫ. В изучаемой группе у пациентов с ОКСпST выполнение первичного ЧКВ ассоциировалось с достоверно меньшей летальностью только у тех, кто имел высокий риск по шкале РЕКОРД-м, но не у пациентов невысокого риска. У пациентов, которым провели срочные коронарные вмешательства частота неблагоприятных событий (смерть, инфаркт миокарда, инсульт) через 6 мес после ОКС была достоверно меньше только в группе с высоким риском по шкале РЕКОРД-м. Таким образом, шкала РЕКОРД-м может уже на догоспитальном этапе использоваться для отбора пациентов с ОКС для выполнения инвазивных коронарных процедур.
Патогенетическая роль провоспалительных цитокинов при миалгическом энцефаломиелите
Малашенкова И.К., Крынский С.А., Зуйков И.А., Огурцов Д.П., Жарова М.А., Дидковский Н.А.
Лаборатория клинической иммунологии
(Без тезисов)
Маркеры аутоагрессии при хронической герпесвирусной инфекции
Малашенкова И.К., Добровольская Е.И., Зуйков И.А., Компанеец И.А., Каблашова Н.А., Огурцов Д.П., Жарова М.А., Дидковский Н.А.
Лаборатория клинической иммунологии
(Без тезисов)